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我們在進(jìn)行二手熒光定量PCR儀實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)遇到的3個(gè)參數(shù)
更新時(shí)間:2022-10-23   點(diǎn)擊次數(shù):1339次
   二手熒光定量PCR儀是一種可以實(shí)時(shí)檢測核酸擴(kuò)增的技術(shù),在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)的變化對(duì)PCR過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,以此實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析。無需參比染料,無需定期校準(zhǔn),采用歸一化算法,快速準(zhǔn)確直觀的呈現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用戶使用方便簡潔。我們在做熒光定量PCR時(shí)提到的三個(gè)名稱:擴(kuò)增曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線,熔解曲線。
 
 ?。?)擴(kuò)增曲線:擴(kuò)增曲線有兩種展現(xiàn)形式,一種是線性,一種是對(duì)數(shù)形式。我們通常是用CT來推算樣品中樣品的濃度。CT值越高說明模板濃度越低。上面也詳細(xì)說明了原理,在這里就不過多贅述。
 
 ?。?)標(biāo)準(zhǔn)曲線:將已知濃度的樣品(標(biāo)準(zhǔn)品)經(jīng)過梯度稀釋后分別取樣進(jìn)行熒光定量PCR,得到的一系列的Ct值,用這個(gè)Ct值與Log模板數(shù)對(duì)應(yīng)可以得到一個(gè)相關(guān)的曲線,我們叫標(biāo)準(zhǔn)曲線。可以用這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中的一些參數(shù)來判斷這個(gè)熒光定量PCR體系的優(yōu)劣。
 
  (3)熔解曲線:Tm值,MeltingTemperature(解鏈溫度),PCR雙鏈產(chǎn)物的退火溫度。這兩個(gè)圖是在熒光定量PCR結(jié)束后,對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行逐步升溫時(shí)進(jìn)行的監(jiān)測,可以看到在達(dá)到其解鏈溫度時(shí),熒光信號(hào)會(huì)有一個(gè)忽然的下降。我們將測得的這個(gè)曲線叫做熔解曲線。理論上如果PCR得到特異性產(chǎn)物則只有一個(gè)Tm值,在溶解曲線上表示只有單峰存在。如果是多相峰,那么可以判斷產(chǎn)物不是單一的,發(fā)生了非特異擴(kuò)增。
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